TaKaRa One Shot LA PCR Mixを用いる場合
One Shot LA PCR Mix(以下One Shot)は、PCRに必要な酵素、dNTP、バッファーがあらかじめ混合されている溶液。
テンプレートとプライマーを加え、DDWでvolumeを調製するだけでPCRを行うことができる。
参考までに、One Shoの組成(TaKaRaプロトコルより)
| TaKaRa LA Taq |
2.5 units / 2.5 ul |
| dNTP Mixture |
2x conc.; 各0.8 mM |
| LA PCR Buf. II |
2x con.; 5 mM(Mg2+含む) |
PCR反応溶液の調製(One Shot 1本あたり)
| One Shot |
25 ul |
| Templete |
<1 ug |
| Primer (sense) |
1 ul (50 pmol) |
| Primer (antisense) |
1 ul (50 pmol) |
| DDW |
up to 50 ul |
チューブに加える試薬の順番はどうでもよい。調整後30分経ってから反応してもOK。(TaKaRaプロトコルより)
調製したらチューブをタッピングして溶液を攪拌。スピンダウン後、PCRを行う。
文責:T