1:アガロースゲルからDNA断片を含む部分のゲルを切り出す。
2:ゲルを細かく切り、SUPRECのフィルター付きカップに入れる。
3:-80℃で10min凍結させた後、37℃のウォーターバスで5min解凍する。
4:12,000rpmで10min遠心し、チューブに落ちた溶液を新しいチューブに移す。
5:ゲルが残っているならば、TEを200ul加え、なくなるまで4を繰り返す。
6:移し替えた溶液に等量のブタノールを加えてボルテックスする。
7:12,000rpmで1min遠心し、上澄みを捨てる。
8:DNA溶液が〜200ul程度になるまでブタノール濃縮EFを繰り返す。
9:1/10量のNaOAc、2.5倍量の99%エタノールを加えてボルテックスする。
10:-20℃で20min、DNAを沈殿させる。
11:4℃、14,000rpmで5min遠心し、上澄みを捨てる。
12:200ulの70%エタノールでリンスした後、12,000rpmで1min遠心し、上澄みを捨てる。
13:真空乾燥を5min行い、50ulのTEを加えてボルテックスする。
14:スピンダウンの後、-20℃で保存する。
*操作2で、どこまでゲルを細かく切れるかで、この実験の全てが決まる。
*操作3で、凍結させたまま、もしくはウォーターバスの中で半日ほどは放置可能。
*操作6、7,8のブタノール濃縮は、一回目はそれほど濃縮されないが、二回目以降は驚くほど濃縮される。
ほどほどにしておかないと、知らぬ間にDNA溶液がほんのわずかになってしまうことがある。
文責:T