Transter

１）メンブレンの上隅にシャーペンで数字をマークする。（培地に接する方の面にマークする。）

２）ピンセット２本を使って、メンブレンに10 mM IPTG 600 μl を含ませ、コロニーの生えた培地プレート上に静かに載せる。この時、メンブレンの裏表に注意する。（ニトロセルロースの面には少し光沢がある。）

３）ピンセットを使って培地とメンブレンの間の気泡を抜く。

３）注射針でメンブレンの上から非対称に穴を５〜６個開け、培地プレートの裏にその位置をマジックで印を付けて位置マーカーにする。

Alkali treatment to the membrane

1）アルカリ処理：メンブレンを静かに剥がし、コロニー面を上にして0.5N NaOHを浸したろ紙上に２分間置き、別のろ紙上で１分ほど乾燥させる。この操作を２回行う。

2）中和処理：メンブレンを1M Tris-Cl (pH 7.5) を浸したろ紙上に２分間置き、別のろ紙上で乾燥させた。この操作を２回行う。

3）TBSで5分×2回洗浄する。

4）メンブレンを乾燥させる。

Western blot

１）ブロッキング（室温15分）

２）一次抗体処理（37℃１時間）

３）Washing（TBS　5分、TBST　10分、TBS　5分）

４）二次抗体処理（Anti-Rabbit IgG 5000倍希釈で、室温１時間）

５）Washing（TBS　5分、TBST　10分、TBS　5分）

６）検出（ECL SYSTEM）

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