ゲル板の作製

１　ゲル板（□）のガイド沿いに、DDWで湿らせたスペーサーをはめる。

２　ゲル板（凹）をしっかりとはめる。両板を立て、底面を揃える。

３　同じ強さのクリップを下の方からとめていく。ゲル板が机に垂直に立つように！

４　分離ゲルを一定の早さで静かに流し込む。ゲル板（凹）のへこんだ部分から約20mm下に来るまで。

５　1mlのイソプロパノールを分離ゲルの上に重層させる。

６　1時間後、分離ゲルが重合していればイソプロパノールを捨て、代わりにDDWを重層させる。

　　ゲルが完全に重合したら使用可能。2〜3時間後くらい。気候によって若干違う。
　　ビーカーに余った分離ゲルは置いておき、その固まり具合で判断する。

　　DDWを重層させ、サランラップで包んでおけば一晩置くこともできる。

分離ゲルの作製

ゲル組成（15ml：ゲル板2枚分、単位：ml）分離ゲルと濃縮ゲルはTrisの種類が違う

	6%	8%	10%	12%	15%
DDW	7.9	6.9	5.9	4.9	3.4
30% acrylamide	3.0	4.0	5.0	6.0	7.5
1.5M Tris (pH 8.8)	3.8	3.8	3.8	3.8	3.8
10% SDS	0.15	0.15	0.15	0.15	0.15
10% APS	0.15	0.15	0.15	0.15	0.15
TEMED	0.012	0.009	0.006	0.006	0.006

１　20mlビーカーにスターラーバー、10mlビーカーにDDWを入れる。

２　20mlビーカーに30%アクリルアミド溶液を入れる。そのピペットで10mlビーカーからDDWを測りとる。

３　1.5M Tris、10% SDSを加えたら、スターラーで撹拌する。撹拌しながら10% APS、TEMEDの順で加える。

４　撹拌したらゲル板に流し込む。

濃縮ゲルの作製

ゲル組成（ゲル板2枚分、単位：ml）分離ゲルと濃縮ゲルはTrisの種類が違う

	4%
DDW	4.4
30% acrylamide	0.8
1M Tris (pH 6.8)	0.375
10% SDS	0.06
10% APS	0.06
TEMED	0.006

１　分離ゲルと同じ要領で10mlビーカーに調製する。

２　濃縮ゲルをゲル板に流し込む前に、分離ゲルをDDWでリンスし、余分な水分は濾紙で除く。

３　濃縮ゲルをゲル板いっぱいに流し込み、DDWで湿らせたコームを差し込む。

４　ゲルが完全に重合したら使用可能。15分後くらい。気候によって若干違う。
　　ビーカーに余った濃縮ゲルは置いておき、その固まり具合で判断する。

５　ゆっくりとコームをはずし、ウェルの中の未重合ゲルをDDWで洗い流す。

ゲル板の泳動槽へのセット

１　ピンセットでスペーサーをはずす（先にクリップをはずさないこと！　ゲル板がずれる）

２　クリップを下からはずし、下層に1x running buf (used)を入れた泳動槽にセットし、クリップでとめる。
　　bufがゲルよりも上に来ることを確認。ゲル板（凹）が内側であることを確認。

３　上層に1x running buf (new)を、ゲルが全部浸るまで流し込む。
　　ゲル板の下部に泡があれば注射器などで取り除く。

４　サンプルをアプライする。
　　サンプルはアプライする前に軽くソニケーションを行うとなおよい。
　　水溶性であれば、12,000rpmで1〜10分間遠心し、上澄みをアプライすれば綺麗な結果が得られる。

５　コードをつなぎ、ゲル1枚につき30mAで泳動する。青いラインが下から5mmに来るまで泳動。
　　泳動時間は40〜70分。気候によって時間は変わる。分子量によっても最適な時間は変わる。
　　ゲル1枚につき20mAで流すと、時間はかかるが分離能はよくなる。

後片付け

１　使用したゲル板はすぐに水につける（ゲルがこびりつく）
　　中性洗剤を付けたスポンジで洗う。落としたり、他のゲル板とぶつけて割れやすいので注意。

２　充分にすすぎ、DDWでリンスした後、イソプロパノールでリンスする。

３　ゲル板立てに立てて乾燥させる。

文責：H女史が作製したものをTが改変