・5-10 mlのYPDもしくはSC培地で振盪培養する（30℃）。

　

・翌日、50-100 mlの培地に移し、OD600が0.5-1.0になるまでさらに振盪 培養（30℃）。

目安として、YPDなら4-5時間、SCなら6-8時間。

　

・1,000Xg 10分で遠心した後、半量のDDW（室温）で洗う。

　

・1,000Xg 10分で遠心した後、最初の量の1/10の1XLiAc/TEで洗う。

　

・1,000Xg 10分で遠心した後、最初の量の1/50の1XLiAc/TEに沈殿を溶かし、30℃で1時間静 置。

　

・1,000Xg 10分で遠心した後、12% Glycerol 1XLiAc/TEに沈殿を溶かす。

1 mlの場合、20% Glycerolを0.6ul、10XLiAc/TEを0.1 ul、DDWを0.3 ul加える。

　

・チューブに100 ulずつ分注して-70℃で保存。

急激に凍らすと形質転換能が低下するので、液体窒 素は使用しない。

文責：ADA