strain

PJ69-4A: two-hybrid screen用

YJL17B: one-hybrid screen用

　

medium

YPD: ベクターの入っていないホストの株の場合

SC (synthetic complete): ベクターの入っている株の場合

　

　YPD（液体培地の場合はAgarを入れない）

Bacto pepton	10 g
Yeast extract	5 g
D-Glucose*1	10 g
Bacto agar	7.5 g
total	500 ml

オートクレーヴをかけた後に5N NaOHを500 ul加える。

　

　SC（液体培地の場合はAgarを入れない）

yeast Nit. Base	3.35 g
10X dropout solution*2	50 ml
D-Glucose*1	10 g
Bacto agar	7.5 g
total	500 ml

オートクレーヴをかけた後に5N NaOHを125 ml加える。

　

　*1　Glucoseを入れた場合オートクレ ーヴの時間は15分に止める。それ以上すると焦げて茶色になってしまう。これを避け るためにあらかじめ40%(W/V) Glucoseを作っておき、オートクレーヴ後に25 ml加える、という方法もある。この場合、その分のDW量をあらかじめ減らしてお く。

　*2　cultureしたいyeastがどんなベ クターを持っているかによってアミノ酸の組成が異なる。組成は以下の通り。

　

　10X dropout solution

L-Isoleucine	30 mg
L-Valine	150 mg
L-Adenine hemisulfate salt	20 mg	-Ade(A)
L-Arginine HCL	20 mg
L-Histidine HCL monohydrate	20 mg	-His(H)
L-Leucine	100 mg	-Leu(L)
L-Lysine HCL	30 mg
L-Methyonine	20 mg
L-Phenylalanine	50 mg
L-Threonine	200 mg
L-Tryptophan	20 mg	-Trp(W)
L-Tyrosine	30 mg
L-Uracil	20 mg
total	100 ml

使用するベクターによって異なるが、私達の研究室では以下の通り。

　

pGBD-C1〜C3（ベイトベクター）を持つyeast: -Trp培地を使用

pGAD-C1〜C3, pACT（プレイベクター）を持つyeast: -Leu培地を使用

上の両方（ベイトとプレイ）を持つyeast: -Trp, -Leu培地を使用

two hybrid screeningを行う場合: -Trp, -Leu, -His培地（1st screen）、-Trp, -Leu, -His, -Ade培地（2nd screen）を使用

文責：ADA