PBSその他試薬作製

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ES用PBS

1. ES-PBS用の1L瓶は先にメスシリンダーで1Lを測ってラベル後、乾熱滅菌しておく。
2. クリーンベンチの中で瓶に5つtabletを入れ、デカンタで水を約2本、1Lの目盛りの少し上まで入れる。
3. 火焔滅菌してキャップした後、アルミホイルの光沢面を外側にしてキャップを包む。瓶にESと書いてautoclave。4℃保存。

Feeder用PBS

• クリーンベンチでtabletを2つ入れ、MilliQ generatorから直接400mlの目盛りの少し上までMilliQを入れてautoclave。4℃保存。

Trypsinの分注

1. 6ml tubeをラックに一つずつ火焔滅菌しながら立てる。10ml pipetで4.5mlずつ分注
2. 14ml tubeをラックに同様に立てる。Trypsin-EDTAを1mlずつ分注
3. Feeder用PBSを4mlずつ加えて終了
4. 火焔滅菌 → シール → naming。-20℃。

0.1% Gelatin

• 普通の電子天秤で1gを測って、1L bottleに直接入れ、 1Lの目盛りの少し上までMilliQ generatorからMilliQを直接入れてautoclave。室温保存。

FCS非働化、分注

1. 4℃でFCSをO/Nで融解。
2. 55℃ 30minで非働化。
3. 転倒混和してからクリーンベンチの中で50mlずつ分注
4. 火焔滅菌、キャップ、ラブフィルムして-20℃保存

G418

• Geneticin net100mg/ml in H₂O (ES用)。 -20℃。現在125μl/40mlESmで使っている。

Mitomycin C

• MMC 1 vial / 5ml PBS。filtrize。4℃。

100x nucleosides

1. 250ml bottleにES用H₂Oを150ml入れる。
2. Adenosine 120mg, Guanosine 127.5mg, Cytidine 109.5mg, Uridine 109.5mg, Thymidine 36mg
3. 37℃, 1-2hrs(透明になるまで)dissolve。
4. 濾過滅菌し-20℃へ。

LIF

• 50μlずつ1.5ml tubeに分注。-20℃保存。

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