Cloning (pick up)
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- 2時間前に通常のESMでmedium change
- PBS >70ml用意、Trypsin >840μl用意
- 48well plateをESM 200μlで置換 (分注器)
- 顕微鏡をアルコールで消毒してクリーンベンチに入れる
- ※ 60wellに7μlずつTrypsinを入れて蓋をしめる
- 6cm dishを１枚出して3ml PBSで一回洗って、4ml
PBSを入れる
- Pick up 12clones → Trypsinの中に入れる
- 48well dishを取り出す。
- Medium 10μl を48well dishよりとって60wellの上で20〜30回
suspendし、48wellにtransfer
- 最初のうちはsuspensionを確認してから37℃へ戻す。
- ※からをdishの枚数分繰り返す
今までの最短は3時間40分。
形態がコンパクトにまとまって分化傾向の少ないESコロニー
をpick upする。周辺部に扁平な分化細胞の目立つコロニー
はなるべくさける。
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