day -7 wild type Feeder Thaw 2/5 + 1/5x3
day -5 wild type Feeder (2/5) MMC処理 (6cm dish 1枚)
day -4 wild type Feeder (1/5x3) MMC処理 (6cm dish 10枚以上)
neo Feeder Thaw 1/5x5
TT2 Thaw
targetting vector Enzyme cut
day -3 targetting vector P/C EtOH precipitation
TT2 m/c
day -2 TT2 s/c >8枚へ
day -1 neo Feeder MMC処理 (6cm dish 10枚以上)
day 0 Electroporation(Elpo)
day 1 TT2 post Elpo Gm/c
day 2 TT2 post Elpo Gm/c
day 3 TT2 post Elpo Gm/c
neo Feeder Thaw 1/5x5
day 4 TT2 post Elpo Gm/c
wild type Feeder Thaw 1/5x5
day 5 TT2 post Elpo Gm/c
48穴6枚 gelatin coat
day 6 TT2 post Elpo Gm/c
neo Feeder MMC処理 48穴6枚
24穴12枚 gelatin coat
day 7-8 cloning(pick up)
WT Feeder MMC処理 24穴12枚
day 8-10頃 順次、48穴から24穴へ(12hおきにチェック)
day 9-12頃 順次 Freeze(12hおき)
day 14-18頃 DNA抽出
細胞の増え方等によって、適宜、日程を調整する。