Subculture of ES cells

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比較的形態の良いESコロニー(細胞が小さく、コンパクトにまとまっている)。
ES colony with good morphology

  1. warm ESM。ESを観察。2時間前に3ml/plateでm.c.
  2. warm ESM, TE, PBS
  3. aspirate ESM, wash once with 3ml PBS
  4. add 0.5ml TE, incubate at 37℃ for 2min
  5. カウントの準備、Feeder plateの準備(メディウムを吸引し、ESm 5mlで置換する)
  6. 顕微鏡の横でかんかん叩く(2分)
  7. 1枚なら1.5ml ESM加えて2ml pipetでsuspend ; 3-4回。(5枚なら0.5mlずつESM加えて、5ml pipetでsuspend)
  8. count。4-5 x 105/plateでまく(慣れれば大体の細胞数を予測して、Feeder上にESを播いた後で細胞数を計測した方がよい(incubatorの外にESを置いておく時間を減らすため))。
  9. Feeder dishのESMにpipetmanで細胞を加え、縦横10回ずつ水平に振盪。2回繰り返す。できればmediumにESをsuspendしてからまく。

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