Thawing ES cells

14ml tubeにESMを9mlずつ入れておく。遠心器セット
(24穴よりfreezeしたものについては、medium 800μl(1.8ml tube)あるいはmedium 200μl(1.5ml tube)をそのまま加えて遠心。)
37℃で解凍。3mmぐらいの小さい塊になったらクリーンベンチへ入れる。1ml pipetteで14ml tubeにtransferし、1回共洗い。転倒混和する
700rpm 5min (Feederは3min～5min)で遠心。
aspirate sup, add ESM up to 5ml。セラムチューブからそのままthawした場合は、残り100-200μlまで2ml pipetで慎重に吸引、pipetmanで1000μlのESMを加える。
やさしくsingle cell suspension。塊が見えなくなるまで。(セラムチューブでは青チップで2-3回pelletをはがすつもりでsuspendする。)
( count : 6cm dish 1枚に5 x 10⁵のESを入れる)
ESとメディウム合計5ml (24wからfreezeした場合は12w plateに1mlをそのまま)になるように播く。
翌日 (24hr後) medium change。