私の日記

日記帳11　ブタの体外受精

（H16年6月27日）　14）媒精方法その2　受精後培養

　 ⑦卵子を精子と一緒にBO液中で4～6時間培養することによって受精卵を得る
　 ⑧培養後BMOC-2液に移し、洗浄する
　 ⑨流動パラフィンでおおった0.1mlBMOC-2液中で培養する
　 ⑩（図3）培養開始後18～20時間で卵核胞崩壊（GVBD、GV期からLD期に移ることをいう。LD期は図3E）し、22～28時間で第1減数分裂（M-Ⅰ）に、36～40時間で第2減数分裂中期（M-Ⅱ）へ移行する
2004年06月27日 17時03分10秒

（H16年6月27日）　14）媒精方法その1

　 ①44～48時間成熟培養した卵子（顆粒層細胞・卵丘細胞を卵胞細胞というが、それらが付着した状態の卵子である）を吸引し、TCM-199Aに移す
　 ②卵胞細胞の付着した卵子を、1群の卵子数が10～15個ずつの群に分ける
　 ③BO液に群のまま移し替える。卵子をピペットで出し入れしてBO液をなじませる
　 ④流動パラフィンでおおった0.1mlBO液（39℃）内に、10～15個ずつの卵子を移し替える
　 ⑤前培養後の精子を希釈後、取り出し
　 ⑥1～20x10の5乗/mlになるように受精培地（BO液）に精子を注入する
2004年06月27日 16時44分31秒

（H16年6月27日）　卵胞卵子の成熟培養

　12）シャーレに卵巣をいれ、メスで卵胞を切開する。顆粒膜細胞に囲まれた卵子をメスの先端で卵胞の内側をこすって回収する
　13）顆粒膜細胞あるいは2～3層の卵丘細胞が付着し、均一な細胞質を有する卵胞卵子（図2）をピペットで吸引する
　13-1）卵胞細胞を入れておいたペトリ皿を容器Aから出す
　13-2）ペトリ皿に卵胞卵子を40～60個入れる
　13-3）ペトリ皿を容器Aに戻す。ペトリ皿中には顆粒膜細胞、反転した状態で卵子が付いた上体の卵胞が2個、卵丘細胞・顆粒膜細胞が付いた卵子が40～60個、以上のものが胚っている
　13-4）容器Aをそっくりインキュベーターに戻し、44～48時間、成熟培養する
2004年06月27日 16時26分18秒

（H16年6月24日）　卵胞細胞を用意する

　 5）卵巣間膜が付着する部位からは脈管や神経が卵巣に出入りするから、ここを卵巣門と呼ぶ。その卵巣門を切り取り、滅菌タオルで血液を取り除く
　 6）共培養の卵胞細胞を回収するために、眼科せん刀で直径約6mmの卵胞を切り出す
　 7）切り出した卵胞から、卵胞を取り巻く結合組織をむしりとる
　 8）卵胞内が透明なものを選び、卵胞をピンセットで破る
　 9）卵子の近くを一本のピンセットでつまみ、もう一方のピンセットで挟むようにして卵胞を裏返す
　10）卵胞2個をペトリ皿に移し、ピンセットで莢膜細胞と顆粒膜細胞を分離し、それら全部をペトリ皿に保管しておく
　11）ペトリ皿を水をしみこませた紙タオルを敷いた容器Aの中に移し、インキュベーターに保存する。卵胞細胞の集団ができ上がったことになる
2004年06月24日 18時06分43秒

（Ｈ16年6月23日）　卵巣の回収

　 0）この章は、『生殖機能細胞の培養法』99ページからの図と文言をそっくり利用し、ウェブページの番号は、その書籍の図をコピーした「配布資料」の丸番号を、それに相当する片括弧番号に変換して記載する。配布する資料の番号は、だから、このウェブページの番号と一致させなくてはならない

　 1）保温ジャーに温水を入れる
　 2)内臓検査の前に卵巣を摘出する
　 3)発泡スチロールで包んだビーカーに卵巣を回収する
　 4)保温ジャーの温水がビーカーの中に入らないようにして、ビーカーをジャーに入れ、実験室に持ち帰る
　 a)図1（生殖機能細胞の培養法99ページからコピーする、以下書名は略し、ページだけを示す）は、回収したブタの卵巣である
2004年06月23日 17時10分53秒

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